O Kanamycin ELISA Test Kit do ™ de REAGEN é um immunoassay competitivo da enzima para a análise quantitativa do Kanamycin na carne/fígado/rim, no lysate da pilha, na urina, no soro e no leite.
Recuperação (>80%), rápidas altos (10-40 minutos), e métodos eficazes na redução de custos da extração.
O limite de detecção é 0,2 ng/g.
Reprodutibilidade alta.
Um ensaio rápido de ELISA (menos de 1 hora apesar do número de amostras).
O método é baseado em um ensaio colorimetric competitivo de ELISA. O kanamycin-BSA foi revestido nos poços da placa. Durante a análise, a amostra e o anticorpo do Kanamycin (anticorpo #1) e o HRP-conjugado (anticorpo HRP-conjugado #2) são adicionados aos poços para a incubação. Se o resíduo do Kanamycin esta presente na amostra, competirá com o Kanamycin nos poços da placa para o anticorpo do Kanamycin, o anticorpo secundário, etiquetado com uma enzima da peroxidase, alvos o anticorpo preliminar que é complexed à droga revestida nos poços da placa. A intensidade resultante da cor, após a adição da carcaça de HRP (TMB), tem um relacionamento inverso com a concentração do resíduo do Kanamycin na amostra.
O Kanamycin ELISA Test Kit do ™ de REAGEN tem a capacidade para 96 determinações ou teste de 42 amostras em duplicado (supondo 12 poços para padrões). Retorne todos os microwells não utilizados ao saco da folha e reseal os com o dessecativo fornecido no pacote original. Armazene o jogo em 2-8°C *. A vida útil é 12 meses em que o jogo é armazenado corretamente.
Kit Contents | Uma quantidade | Armazenamento |
placa Kanamycin-revestida | bem placa 1 x 96 | 2-8°C |
Padrões do Kanamycin Controle negativo (tubo branco do TAMPÃO) 0,2 ng/mL (tubo amarelo do TAMPÃO) 0,6 ng/mL (tubo alaranjado do TAMPÃO) 1,8 ng/mL (tubo cor-de-rosa do tampão) 5,4 ng/mL (tubo roxo do tampão) 16,2 ng/mL (tubo do tampão azul) 1000 ng/mL (tubo cravando, opcional, vermelho do tampão) |
1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL |
2-8℃
|
Kanamycin Ab#1 | 6.0mL | 2-8℃ |
Ab#2 HRP-conjugado | 6.0mL | |
diluente 10×Sample | 15 mL | |
Solução da lavagem 20× | 28mL | |
Amortecedor da parada | 12mL | |
Carcaça de TMB | 12mL | |
amortecedor 10×Sample exterior (opcional) | 15mL | |
Amortecedor do equilíbrio da amostra | 2 mL |
Se você não está planejando usar o jogo para mais de 1 mês, o estoque padrão do Kanamycin da loja, anticorpo #1and do Kanamycin HRP-conjugou o anticorpo #2 em -20°C ou em um congelador.
Tipo da amostra | Limite de detecção (ng/g ou ppb) |
Peixes/camarão/carne/fígado/rim | 8 |
Pilha Lysate | 2 |
Urina /Serum | 5 |
Leite | 2 |
Analytes | Reatividade cruzada (%) |
Kanamycin | 100 |
Estreptomicina | < 0=""> |
Dihydrostreptomycin | < 0=""> |
Neomycin | < 0=""> |
Leitor da placa de Microtiter (450 nanômetro)
Misturador do tecido (por exemplo homogenizador do mestre do tecido de Omni)
Misturador do redemoinho (por exemplo misturador de Genie Vortex de VWR)
pipeta 10, 20, 100 e 1000 do uL
pipeta do Multi-canal: 50-300 uL (opcional)
Seja certo que as amostras estão armazenadas corretamente. Geralmente, as amostras devem ser refrigeradas em 2-4°C por não mais de 1-2 dias. Amostras do gelo a um mínimo de -20°C se precisam de ser armazenados por um período mais longo. As amostras congeladas podem ser thawed em temps da sala (20 – 25°C/68 – 77°F) ou em um refrigerador antes de usar.
Tome uL 100 do lysate da pilha, adicione uL 900 do amortecedor do diluente 1×Sample, misture-o bem.
Centrifugador por 5 minutos em 4000 x G.
Tome uL 50 do supernatant pelo poço para o ensaio.
Nota: Fator da diluição: 10.
A 1,0 g da amostra homogeneizada, adicione 4.0mL do amortecedor 1×Sample exterior,
Redemoinho a amostra pelos minutos 1 com misturador do redemoinho.
Centrifugue a amostra por 5 minutos em 4.000 x G.
Transfira com cuidado 200uL da camada superior a um tubo novo, adicione 1.375mLdodiluentedaamostra1Xe25uLdoamortecedordoequilíbriodaamostra, redemoinhopor30segundos.
Use 50uL pelo poço para o ensaio.
Nota: Fator da diluição: 40.
Tome 50uL da urina ou a amostra do soro, adiciona 1,2 mL do diluente da amostra 1X, mistura-os bem.
Centrifugador por 5 minutos em 4.000 x G.
Tome 50uL do supernatant pelo poço para o ensaio.
Nota: Fator da diluição: 25.
Nota: Fator da diluição: 10
IMPORTANTE: Todos os reagentes devem ser trazidos até a temperatura ambiente antes de usar (em 1 – 2 horas 20 – 25°C/68 –°F) 77; Certifique-se que você dos “seção lida avisos e das precauções” em soluções da página 3. deve ser preparado apenas antes do teste de ELISA. Todos os reagentes devem ser misturados delicadamente invertendo ou rodando antes do uso. Prepare os volumes que são necessários para o número de poços que estão sendo corridos. Não retorne os reagentes aos tubos/garrafas conservados em estoque originais. Usar reservatórios descartáveis ao segurar reagentes pode minimizar o risco de contaminação e é recomendada.
Mistura 1 volume da solução da lavagem 20X com 19 volumes de água destilada.
Etiquete as tiras individuais que serão usados e os reagentes da parte alíquota como o seguinte exemplo:
Componente | Volume pela reação | 24 reações |
Anticorpo #1 do Kanamycin | 50uL | 1.2mL |
Ab HRP-conjugado #2 | 50uL | 1.2mL |
solução da lavagem 1X | 1,0 mL | 24mL |
Amortecedor da parada | uL 100 | 2,4 mL |
Carcaça de TMB | uL 100 | 2,4 mL |
Adicione uL 50 de padrões de cada Kanamycin em duplicado em poços diferentes (adicione padrões para chapear somente na ordem da baixa concentração à concentração alta).
Adicione uL 50 de cada amostra em duplicado em poços diferentes da amostra.
Adicione uL 50 uL HRP-Conjugar Ab#2 a cada poço e 50 do anticorpo #1 do Kanamycin a cada poço. Misture bem delicadamente balançando a placa manualmente para 30s.
Incube a placa por 30 minutos na temperatura ambiente (20 – 25°C/68 – 77°F). (Evite a luz solar direta e partes superiores frias do banco durante a incubação. Cobrindo a placa de microtiter quando incubar for recomendada).
Lave a placa 4 vezes com o uL 250 da solução da lavagem 1X. Após a última lavagem, inverta a placa e bata delicadamente o seco de placa nas toalhas de papel (execute o passo seguinte imediatamente depois das lavagens da placa. Não permita que a placa areje seco entre etapas de funcionamento).
Adicione uL 100 da carcaça de TMB. Cronometre a reação imediatamente depois de adicionar a carcaça. Misture a solução delicadamente balançando a placa manualmente para 30s ao incubar (não põe nenhuma carcaça de volta ao recipiente original para evitar nenhuma contaminação potencial. Toda a solução da carcaça que exibe a coloração é indicativa da deterioração e deve ser rejeitada. Cobrindo a placa de microtiter quando incubar for recomendada).
Após a incubação por 15 minutos na temperatura ambiente (o°F) 20 – 25°C/68 – 77, adiciona uL 100 do amortecedor da parada para parar a reação de enzima.
Leia a placa que segue o mais cedo possível a adição de amortecedor da parada em um leitor da placa com o comprimento de onda de 450 nanômetro (antes da leitura, use uma limpeza sem fiapos na parte inferior da placa para se assegurar de que nenhuma umidade ou impressão digital interfira com as leituras).
Uma curva padrão pode ser construída traçando a absorvência relativa média (%) obteve de cada padrão de referência contra sua concentração em ng/mL em uma curva logarítmica.
A absorvência relativa (%) = padrão da absorvência ou amostra zero x 100
Use os valores relativos médios da absorvência para cada amostra para determinar a concentração correspondente da droga testada em ng/mL da curva padrão.
A seguinte figura é uma curva padrão do chloramphenicol típico.
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